聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于體外擴(kuò)增特定DNA片段的生物技術(shù)。PCR反應(yīng)假陽性是指在PCR檢測過程中，出現(xiàn)本應(yīng)為陰性的樣本被錯誤地檢測為陽性的結(jié)果。
PCR反應(yīng)假陽性通常由以下原因引起：
1. 實(shí)驗(yàn)室污染：
核酸氣溶膠污染：空氣與液體面摩擦、離心機(jī)離心、劇烈搖動反應(yīng)管、PCR開蓋、吸樣時及移液器的反復(fù)吸樣等都會產(chǎn)生核酸氣溶膠，這些氣溶膠可能含有之前的PCR產(chǎn)物，導(dǎo)致假陽性。
樣本間交叉污染：收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴(yán)，不同樣本移液時未更換槍尖，移液器等實(shí)驗(yàn)器具未及時消毒，不同樣本同時開蓋或樣本劇烈震蕩導(dǎo)致氣溶膠形成擴(kuò)散，相互交叉污染。
2. 試劑污染：
在PCR組分試劑加樣過程中，移液器、容器、陰性對照及其它試劑可能被核酸模板或陽性對照污染。
PCR試劑加樣過程中需通過冰浴處理，但這一過程也存在污染風(fēng)險。
3. 擴(kuò)增產(chǎn)物污染：
大量拷貝的PCR產(chǎn)物泄漏或擴(kuò)增后的PCR反應(yīng)管意外開蓋，是最主要的污染問題。由于PCR產(chǎn)物拷貝量大，極微量的污染就可能形成假陽性。
4. 克隆質(zhì)粒污染：
作為陽性質(zhì)控品的克隆質(zhì)粒外溢也可能導(dǎo)致假陽性。
5. 操作不當(dāng)：
實(shí)驗(yàn)器材未一次性使用，未戴手套，操作環(huán)境不清潔，未嚴(yán)格遵守PCR操作規(guī)程，多次取樣的試劑未分裝，這些都可能導(dǎo)致假陽性。
6. 引物特異性問題：
引物設(shè)計(jì)不當(dāng)，特異性不高，可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增，從而產(chǎn)生假陽性。
7. 模板問題：
在質(zhì)粒構(gòu)建過程中，模板的影響可能導(dǎo)致假陽性，可能需要使用Dpni進(jìn)行模板消除。
8. 設(shè)備問題：
PCR儀或其他實(shí)驗(yàn)設(shè)備的不恰當(dāng)使用或維護(hù)不當(dāng)也可能導(dǎo)致假陽性。
9. 生物安全問題：
根據(jù)生物安全等級（如BSL3），實(shí)驗(yàn)室操作不當(dāng)可能導(dǎo)致生物安全風(fēng)險，進(jìn)而引起污染和假陽性。
為了避免假陽性，需要采取嚴(yán)格的防污染措施，包括使用專業(yè)的清除劑、PCR Cleaner和Space Cleaner進(jìn)行環(huán)境清潔，以及采用干霧過氧化氫消毒機(jī)等專業(yè)設(shè)備進(jìn)行消毒。同時，遵循正確的操作規(guī)程，設(shè)置陰性對照和陽性對照，及時更換實(shí)驗(yàn)器具，以及在必要時重新設(shè)計(jì)引物或挑選單菌落進(jìn)行測序驗(yàn)證。
