ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）是一種常用的生物化學檢測方法，用于測定樣本中的特定抗原或抗體。為了確保實驗的準確性和可靠性，ELISA樣本的收集、處理和保存需要遵循嚴格的步驟。不同類型的樣本處理方法如下：
1、血清樣本處理
1) 采集：使用無熱原、無內毒素的試管或離心管收集全血，室溫下靜置1-2小時或4℃過夜，讓血液自然凝固。
2) 分離：將試管或離心管以1000×g離心20分鐘，小心收集上層血清。
3) 保存：血清應避免反復凍融，保存在-20℃或-80℃，短期可存于2-8℃冰箱，但不宜超過24-48小時。
2、血漿樣本處理
1) 采集：使用含抗凝劑的采血管或離心管（如EDTA、肝素或枸櫞酸鈉）采集血液，混合均勻。
2) 分離：采集后30分鐘內，4℃下以1000×g離心15分鐘，收集上層血漿。
3) 保存：血漿保存條件與血清相同，避免反復凍融。
3、細胞培養(yǎng)上清樣本處理
1) 收集：直接收集細胞培養(yǎng)上清液，離心20分鐘（1000×g），去除細胞碎片和雜質。
2) 保存：立即分裝，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
4、細胞裂解液樣本處理
1) 消化：用胰蛋白酶消化貼壁細胞，再用培養(yǎng)基沖洗。
2) 裂解：收集細胞，用PBS洗滌后，加入蛋白酶抑制劑重懸，可通過反復凍融或超聲處理裂解細胞。
3) 離心：4℃下以1500×g離心10分鐘，收集上清液。
5、組織勻漿樣本處理
1) 清洗：用PBS沖洗組織，去除表面血液和雜質。
2) 勻漿：稱重后，加入適量PBS（1:9重量體積比），用勻漿器在冰上或冰浴中充分勻漿，可額外超聲或凍融裂解。
3) 離心：2-8℃下以5000×g離心5-10分鐘，收集上清液。
6、特殊樣本處理
1) 唾液：在2-8℃下4000×g離心10分鐘，收集上清。
2) 尿液：離心15-20分鐘（1000×g），收集上清。
3) 糞便：采集干糞便，加入PBS勻漿后離心。
通用注意事項:
避免溶血：溶血會導致非特異性顯色，影響結果。
防菌污染：細菌可能含有內源性HRP，導致假陽性。
蛋白酶抑制劑：長期保存時可添加，保護蛋白。
避免反復凍融：每次凍融都會損傷蛋白，應分裝保存。
輕柔操作：混勻樣本時避免劇烈振蕩，以防氣泡和蛋白變性。
樣本保存:
短期：2-8℃，不超過48小時。
長期：-20℃或-80℃，避免反復凍融。
遵循這些標準操作程序，可以最大限度地減少樣本處理過程中的誤差，確保ELISA檢測的準確性。
